一般演題

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PC12細胞のNGF神経分化過程に生じるEGF receptor down-regulationの遺伝子発現制御：渋谷淳^1,2, Lazarovici, P.², Johnson, A.C.³, 片桐康博², Guroff, G.², 畝山智香子¹, 広瀬雅雄¹（¹国立医衛研・病理, ²SGF/NICHD /NIH, ³LMB/DBS/NCI/NIH）

Transcriptional control of EGFR down-regulation by NGF in PC12 cells: Makoto SHIBUTANI ^1,2, Philip LAZAROVICI ², Alfred C. JOHNSON ³, Yasuhiro KATAGIRI ², Gordon GUROFF ², Chikako UNEYAMA¹, Masao HIROSE ¹ (¹Div. of Pathol., Natl. Inst. Health Sci., ²SGF/NICHD/NIH, ³LMB/ DBS/NCI/NIH）

【目的】PC12細胞のNGF神経分化過程に生じるEGFreceptor (EGFR)の慢性的な down-regulationの分子制御機構を検索した。【方法及び結果】PC12細胞をNGF刺激し、EGFRの蛋白質量の経時的変化をWestern blottingにて、mRNA量の変化をNorthern blottingとCompetitive RT-PCRにて検索した。蛋白質量はmRNA量に対応して慢性的に減少し、 無処置対照と比較し、刺激５日目で蛋白で67%, mRNA で85%減少した。ActinomycinD処置後のEGFR mRNAの半減期を比較した結果、NGF刺激の有無でRNA stability に差が無く、更に核 Run-on assayによりNGF刺激５日後でEGFR 転写量が56%減少した。NGF刺激５日後の細胞にEGFR遺伝子プロモーター領域のtransfection後、Reporter gene assayによるプロモーター活性と, RNA template-specific PCRによる実際の転写産物量を測定した結果、両者の著しい低下を認めた。p140^trkを欠損したPC12 nnr5 mutantでのNGF刺激は, EGFRの蛋白質及びmRNA量、EGFRプロモーター活性に影響を与えなかった。同様にDominant-negative (DN) Ras 及びDN Src 細胞でも、NGF刺激によりEGFR蛋白質量は低下しなかった。EGFRの転写抑制因子であるGCF2は、PC12細胞でNGF刺激により経時的にその発現が増加したが、nnr5, DN Ras及びDN Src細胞では増加しなかった。【結論】NGFによるEGFRのdown-regulationは転写レベルで制御され、それはp140^trk, Ras, Src依存性であった。更にその転写抑制にはGCF2の関与が示唆された。