一般演題

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アデノウイルスE1Aと分化抑制因子Idの共発現によるp53変異細胞でのアポトーシス誘導：八下田　美佳、中島　琢磨、小田　鈎一郎（東京理科大・基礎工・生物工）

Coexpression of adenovirus E1A and Id proteins induces apoptosis in rat cells expressing mutated p53： Mika YAGETA, Takuma NAKAJIMA, Kinichiro ODA (Dept. of Biol. Sci. and Technol., Sci. Univ. of Tokyo.)

変異型p53を発現するラット3Y1細胞に、ホルモン誘導性プロモーターを付加したE1A 12S、Id-1H、Id-2H cDNAを導入して樹立されたEId10細胞は、デキサメタゾン投与によりこれら３遺伝子を発現しアポトーシスを誘導する。E1A、Idをそれぞれ単独で発現させた場合にはアポトーシスは誘導されない。これら３遺伝子および変異型p53をそれぞれ構成的に発現するベクターを作製してp53-/-マウス小脳由来細胞A40に一過性に導入し、アポトーシス誘導と変異型p53の同時発現の影響をFACSにより解析した。その結果、E1A単独またはE1AとIdの発現によりアポトーシスが誘導されるが、E1A単独で誘導されるアポトーシスは変異型p53の発現により抑制されるのに対して、E1A、Idにより誘導されるアポトーシスは逆に変異型p53の発現により促進されることが分かった。EId10細胞抽出液を用いた免疫沈降法により、Idは主にE1A、bHLH転写因子E2A(E12/E47)と結合し、pRBとは殆ど結合しないことが分かった。E1A、Idの発現誘導後EId10細胞はS期に蓄積し、G2期に移行することなく死滅する。変異型p53 存在下でのE1AとIdの発現がS期進行の異常を引き起こし、アポトーシスを誘導すると推測される。現在、ヒドロキシ尿素によりG1/S期に同調したEId10細胞の抽出液を用いて、S期に特異的なDHFR、RNR、PCNA遺伝子の発現レベルの変化、サイクリンE/cdk2、サイクリンA/cdk2によるE2F-1/DP1およびIdのリン酸化とDNA複合体形成との関連を解析中である。