ポスターセッション

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ＢＡＣを用いた癌関連遺伝子解析の新技術：ＤＨ法とＱ−Ｂｅｅ法
浅川修一、清水信義：（慶大・医・分子生物）

New methods for the genome analysis using BAC clones: DH method & Q-Bee method: Shuichi ASAKAWA, Nobuyoshi SHIMIZU (Dept. Mol. Biol., Keio Univ. Sch. Med.)

　我々は先に２セットのＢＡＣライブラリー（平均インサートサイズ１１０ｋｂ、１０万クローンおよび平均インサートサイズ１６０ｋｂ、１０万クローン：７．５ゲノム相当）を構築し、様々なゲノム解析、遺伝子解析に利用してきた。最近、これらのＢＡＣライブラリーを極めて効率的にスクリーニングするデジタルハイブリダイゼーション（Digital hybridization: DH）法、および極めて迅速にエキソン・イントロン構造を明らかにできるＢＡＣエキソンエクステンション（Quick BAC exon extension: Q-Bee）法を考案した。ＤＨ法は一度に数百種類のプローブによるスクリーニングを行うことのできる画期的な方法である。まず数百種類のプローブに２進法によるＩＤ番号を付与して作成されるマトリックスに従って数種類のプローブミックスを作成する。次にそれらのプローブミックスを用いてディファレンシャルハイブリダイゼーションを行う。個々のクローンについてそれぞれのプローブミックスに対するポジティブ−ネガティブのパターンを調べることによってそのクローンにハイブリダイズしたプローブが明らかにできる。我々は実際に１２６種類のＳＴＳマーカーを用いてＤＨ法を行った。また１０００種類のプローブを用いてスクリーニングできることも示した(Genomics, in press)。またＱ−Ｂｅｅ法ではｃＤＮＡシーケンスに基づき適当な間隔でプライマーを設計し、ｃＤＮＡをブローブにして単離したＢＡＣをテンプレートに直接シーケンシングを行う。我々はＢＥＥ法を用いて１Ｍｂ程度のサイズをもつParkin遺伝子のエキソン・イントロン構造を極めて迅速に明らかにすることができた(Nature 392: 605-608, 1998)。本学会ではこれらの新しい方法を紹介し、癌関連遺伝子の同定、解析や癌の遺伝子診断の応用について論ずる。