ポスターセッション

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膀胱癌細胞株の腫瘍形質に対するDominant negative ras mutant N116Y による抑制効果：渡邉孝文¹, 篠原信雄², 佐澤陽^2,3, 小木曾嘉文⁴, 小柳知彦², 橋本晃¹, 葛巻暹³ (¹北大・獣医・診断治療, ²北大・医・泌, ³北大・医・癌研遺伝子制御, ⁴長野県立こども病院臨床病理科）

The inhibitory effect of a dominant negative ras mutant N116Y on the transformed phenotypes of a human bladder cancer cell line : Takafumi WATANABE¹, Nobuo SHINOHARA², Ataru SAZAWA^2,3, Yoshifumi OGISO⁴, Tomohiko KOYANAGI², Akira HASHIMOTO¹, Noboru KUZUMAKI³ (¹Dept. Vet. Clin. Sci., Fac. Vet. Med., ²Dept. Urol., ³Lab. Gene Regulation, Cancer Inst., Sch. Med., Hokkaido Univ., ⁴Dept. Clin. Path., Nagano Children's Hospital)

【目的】Dominant negative ras mutant N116Y が 膀胱癌、膵癌、胃癌などの各種癌細胞に対し、増殖抑制を示すことが知られている。しかしその作用機序は、十分解明されていない。今回我々は N116Yの弱発現ベクターを用い、N116Y の膀胱癌細胞株の腫瘍形質抑制に関わるメカニズムを解析した。【材料と方法】膀胱癌細胞株 UMUC-2 に対し 、メタロチオネインプロモーター制御下で N116Y を弱発現させたクローン (UMUC-2-C5、UMUC-2-C13) を作製し、細胞増殖率と軟寒天コロニー形成能を調べた。さらにN116Y 発現による Ras 下流への影響を調べるため、Ras 下流の主要な二つのシグナル伝達経路 ERK と JNK のリン酸化状態を、抗リン酸化 ERK 抗体および抗リン酸化 JNK 抗体を用いて、ウエスタンブロッティング法により解析した。【結果】UMUC-2-C5 における N116Y 遺伝子発現は UMUC-2-C13 よりも有意に高いことが RT-PCR により確認された。UMUC-2-C13の細胞形態に変化は見られなかったが、UMUC-2-C5 では細胞形態の著明な変化が見られた。高 FCS 条件下では、どちらのクローンにおいても細胞増殖率に有意な変化は認められなかったが、軟寒天コロニー形成能は有意に抑制されていた。さらに低 FCS 条件下では、UMUC-2-C5 の細胞増殖率の抑制も観察された。N116Y 発現により ERK リン酸化に有意な変化は見られなかったが、JNK リン酸化の抑制が見られた。【結語】膀胱癌細胞株 UMUC-2 において、N116Y により腫瘍形質が抑制された。さらにこの腫瘍形質抑制効果は JNK 活性化に関わるシグナル伝達経路の抑制による可能性が示唆された。