ポスターセッション

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ＣＤＫ阻害因子ｐ２７とＥ１Ａとの相互作用：野村　創、澤田幸治¹、大滝幸哉　(宮崎医大・臨床検査医学、 ¹札幌医大・医・がん研）

Interaction of CDK inhibitor p27 and adenovirus E1A proteins: Hajime NOMURA,YukiharuSAWADA¹,SachiyaOHTAKI (Dept. Lab. Med., Miyazaki Med. Col., ¹Dept. Mol. Biol., Cancer Res. Inst., Sapporo Med. Univ. Sch. Med.)

　[目的]　アデノウイルスＥ１Ａ蛋白はｐＲＢやｐ３００などの蛋白と相互作用し、細胞周期や転写を調節する。ここではＥ１Ａ蛋白の新しい標的とされるＣＤＫ阻害因子ｐ２７とＥ１Ａとの相互作用とそのＣＤＫのりん酸化反応に対する効果を調べた。
[方法]ラットｐ２７ｃＤＮＡのコード領域を分割してヒスチジン・タグ付加ベクターに組み換えた。アデノウイルス５型と１２型Ｅ１Ａの１２Ｓタイプと１３ＳタイプｃＤＮＡ、および１２型Ｅ１Ａコード領域の各部分をＧＳＴ融合ベクターに組み換えた。それぞれ大腸菌中に発現誘導し、精製した。ＣＤＫ２、ＣＤＫ４は特異抗体を用いてラット細胞より免疫沈降にて分離し、ヒストンＨ１およびＧＳＴ−Ｅ１Ａ蛋白を基質としてりん酸化アッセイを行った。
[結果と考察]ｐ２７は５型および１２型Ｅ１Ａとin vitro で結合した。Ｅ１Ａとの結合にはｐ２７のＮ端領域と中間領域が関与し、Ｃ端領域は結合しなかった。一方、Ｅ１Ａ蛋白は主としてＣ端部分でｐ２７のＮ端領域と結合したが、他の部分の関与も示された。ＧＳＴ−ｐ２７はＣＤＫ２複合体によるヒストンＨ１のりん酸化を阻害したが、ＧＳＴ−Ｅ１Ａ蛋白はこのｐ２７による阻害を解除しなかった。ＣＤＫ２複合体と異なり、ＣＤＫ４複合体はＥ１Ａ蛋白をほとんどりん酸化しなかったが、ＧＳＴ−ｐ２７存在下では逆にＥ１Ａ蛋白のりん酸化が認められた。ＣＤＫ阻害因子ｐ２７がＣＤＫ４複合体の基質特異性を調節する可能性が示された。