ポスターセッション

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組換え体マトリックスメタロプロテイナーゼの大腸菌による発現：松井　泰子¹、伊藤　道恭²、秋澤　俊史¹、佐藤　博³、吉岡　正則¹、清木　元治⁴（¹摂南大・薬・薬品分析化学、²関西医大・微生物、³金沢大・がん研・ウイルス、⁴東大・医科研・癌細胞）

Expression of Membrane-type Matrix Metaroproteinases in E. coli. : Yasuko MATSUI¹, Michiyasu ITOH², Toshifumi AKIZAWA¹, Hiroshi SATO³, Masanori YOSHIOKA¹, Motoharu SEIKI⁴ (¹Dept. Anal. Chem., Facul. Pharm. Sci., Setsunan Univ., ²Dept. Microbiol., Kansai Med. Univ., ³Dept. Virol., Inst. Cancer Res., Kanazawa, Univ., ⁴Dept. Cancer Res., Inst. Med. Sci., Tokyo Univ.)

癌の転移、浸潤に重要な役割を果たしている膜結合型マトリックスメタロプロテイナーゼ（MT1-MMP, MT2-MMP, MT3-MMP）について酵素化学的解析、他のMMPsとの相互作用、およびMT1, 2, 3 の阻害剤検索システムの確立を行う目的で組換え体蛋白質の発現を試みた。ヘモペキシン様ドメイン以下を欠損したMT1, 2, 3-MMP cDNAを発現用ベ クター pTHにクローニングし、大腸菌 BL21 (DE3) にトランスフォーメーション後、IPTG で C 末端に His-6-tag を有する組換え体蛋白質を発現させた。得られた蛋白質は沈殿画分に存在し、尿素で可溶化後 Ni-NTA- resin で精製、Refolding を行った。組換え体 MT 1, 3 は目的サイズの蛋白質の発現を確認した。MT 1 およびMT 3 は proMMP-2の活性化と、蛍光ペプチド基質切断活性を示し、TIMP-2 により阻害された。組換え体 MT 2 は SDS-PAGEで観察すると、目的サイズよりも大きなの蛋白質として発現していたが、Ni-NTA-resin への吸着が確認でき、His-6-tag を有すると考えられた。MT 2 によるproMMP-2 の活性化は、MT 1 および MT 3 に比べ弱く、現在 Refolding の条件検討を行っている。これら組換え体蛋白質を用いた酵素化学的解析、阻害剤検索システムの確立が可能と考えられた。