一般演題

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HCV NS5AとNS5Bの結合能に関する検討：代田幸博^{1, 2}，山下竜也^{1, 2}，Qin Weiping¹，金子周一²，小林健一²，村上清史¹（¹金沢大・がん研・腫瘍分子，²金沢大・第１内科）

Interaction between HCV NS5A and NS5B:Yukihiro SHIROTA^1,2, Tatsuya YAMASHITA^1,2,Qin WEIPING¹, Shuichi KANEKO², Kenichi KOBAYASHI² and Seishi MURAKAMI¹ (¹ Dept. of Molecular oncology,Inst.Cancer Res.,Univ.Kanazawa, ²Dept. Of 1st. Int. Med.,Univ.Kanazawa)

［目的］HCV NS5Aは他のRNA virusとの比較よりviral replication complexの構成因子と推測されるが詳細は明らかでない．我々はRNA-dependent RNA polymeraseであるNS5Bとの蛋白・蛋白相互作用を検討し，replication complexにおけるNS5Aの役割を明らかにすることを目的とした．
［方法］HCVJK-1よりPCRにてNS5AとNS5Bをcloningし，GST-NS5AとFLAG-NS5Bを大腸菌組換え蛋白として精製，GST pull down法にてin vitroでの結合能を検討した．またFLAG-NS5AとGST-NS5Bのmammalian発現plasmidをCOS-1細胞に一過性発現させ，glutathione Sepharoseを用いて共沈し，in vivoでの相互作用を検討した．
［結果］GST pull down法にて，FLAG-NS5BはGST蛋白によってはpull downされなかったが，GST-NS5Aによってpull downされた．またFLAG-NS5AとGST-NS5Bを共発現させたCOS-1細胞のlysatesより，FLAG-NS5Aはglutathione Sepharoseによって共沈した．これらの結果はNS5AとNS5Bがiv vitroならびにin vivoにおいて特異的に結合しうることを示しており，NS5Aがviral replication complexの構成因子であると考えられた． 各種の欠損型NS5Aを用いたNS5B結合領域の限定の結果を報告する．