一般演題

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一酸化窒素によるFas誘導アポトーシスの抑制：小倉　勤, 立道昌幸, 江角浩安（国立がんセ・研・支所・がん治）

Suppression of Fas-mediated apotosis by nitric oxide: Tsutomu OGURA, Masayuki TATEMICHI and Hiroyasu ESUMI (Investigative Treatment Div. Natl. Cancer Ctr. Res. Inst. East)

［目的］FasリガンドーFasシステムによるアポトーシス誘導の機能異常は、免疫疾患や発がん発生・進展に深く関わっている。我々は、アポトーシス実行を担うシステインプロテアーゼカスケードの最終段階に位置するカスパーゼ３の試験管内活性化および活性自身を阻害することを見いだした。本研究では、Fas刺激アポトーシスのNOによる抑制効果とそのメカニズムを解析した。[方法]　ヒトTリンパ球由来Jurkat細胞を抗Fas抗体(500 ng/ml)で処理した。NOの効果は、NO供与体S-nitroso-N-acetyl-DL-penicillamin (SNAP; 0.5 mM)処理により解析した。アポトーシス誘導は、染色体DNAの断片化、蛍光標識カスパーゼ３特異的基質から遊離した蛍光強度の測定によるカスパーゼ３活性誘導を指標とした。カスパーゼ３タンパク質はウエスタンブロット法により解析した。［結果］抗Fas抗体処理２４時間後のJurkat細胞でのカスパーゼ３活性誘導および染色体DNAの断片化はSNAP同時処理により抑制された。抗Fas抗体とSNAP同時処理細胞では、前駆体カスパーゼ３(p32)から酵素N端のプロドメインが付加したp20+p12を生成し、活性体(p17+p12)の生成を阻害した。同様の活性化阻害は、抗Fas抗体とカスパーゼ３特異阻害ペプチドの同時処理でも認められた。［考察］生体内で生成されるNOは、Fas刺激によるアポトーシス誘導の抑制因子としての役割を担っていると考えられる。そのアポトーシス抑制機構は、カスパーゼ３阻害剤と同様にカスパーゼ３活性化の阻害による活性体カスパーゼ３生成の抑制が示唆された。