ポスターセッション

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Propidium IodideとDigitoninを併用したアポトーシスの定量的死細胞率測定法：水元一博,小川尚洋,新山秀昭,楠本正博,前原直樹,佐藤典宏,田中雅夫（九大・医・一外）

Quantitative deteremination of apoptotic cell death using propidium iodide and digitonin：Kazuhiro MIZUMOTO, Takahiro OGAWA, Hideaki NIIYAMA, Masahiro KUSUMOTO, Naoki MAEHARA, Norihiro SATO, Masao TANAKA (Dept. of Surg.I, Kyushu Univ. Fac. of Med.)

【目的】in vitroにおけるアポトーシスの死細胞率を、Propidium Iodide（PI）とDigitoninを併用して定量的に測定し、その有用性を検討した。
【対象と方法】ヒト膵癌培養細胞株MIA PaCa-2にエトポシド10μＭを投与してアポトーシスを誘導した。最初に蛍光色素であるPIを投与して、Fluorescence Multi-Well Plate Readerを用い、(a) 死細胞中のＤＮＡと結合したPI量を測定した。次にdigitoninを投与して全ての細胞膜を破壊し、(b)全細胞中のＤＮＡと結合したPI量を測定した。その比率 [(a)/(b)] でアポトーシス死細胞率を決定した。蛋白合成阻害剤による細胞死抑制効果も同時に判定した。
【結果】エトポシド10μＭの投与によって、MIA PaCa-2は細胞増殖が停止し、４日後に76％の細胞死を認めた。また、この細胞死は蛋白合成阻害剤によって明らかに抑制された。これらの結果は、トリパンブルー法で直接的に測定した死細胞率と極めて類似した結果を示し、かつ２時間以内で簡便に測定することができた。
【結論】PI法は、アポトーシスの定量的死細胞率を正確かつ迅速に測定でき、さらに細胞増殖率も同時に測定可能であり、アポトーシスを評価する上で有効な方法であると思われた。