ポスターセッション

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HL-60細胞における室温誘発アポトーシスの分子機構：大沢　裕^１、志村まり^２、湯尾　明^２、岩田　誠^１、高久史麿^３、石坂幸人^２（^１東京女子医大、神内、^２国立医療セ・研、^３自治医大）

Room temperature induced apoptosis of HL-60: Yutaka OSAWA ¹, Mari SHIMURA², Akira YUO², Makoto IWATA¹, Fumimaro TAKAKU³ Yukihito ISHIZAKA²,（¹Dept. Neurol. Tokyo Women's Med. Col., ¹Dept., ²Int. Med. Ctr. Jpn. Res. Inst., ^３Jichi Med. Sch.)

【目的】我々は、白血病細胞株HL-60を室温に移すことにより急激にアポトーシスが生じること、また同様の現象がJurkat細胞株でも認められることを見出し報告した（FEBS Lett. 417, 379, 1997; Cancer Lett., in press)。今回、この室温誘発アポトーシスの分子機構を解明する目的で、関連するプロテアーゼを解析した。【方法】 Caspase-1及び-3に対する阻害剤（YVAD-CHO及びDEVD-CHO）による阻害効果を解析し、caspase-1、-3及び-4の関与をウエスタンブロット法で解析した。また、ビオチン化テトラペプチド（YVAD-CHO）を用いてHL-60の細胞抽出液中の蛋白質を標識し、電気泳動後、PVDFフィルターにトランスファーした後、アビジン-アルカリホスファターゼを用いて発色、YVAD結合蛋白質を明らかにした。【結果及び結論】 アポトーシスは、YVAD-CHOの添加により抑制されたが、DEVD-CHOでは阻害されなかった。ウエスタンブロットでは、caspase-3の活性化に伴う産物の分解が検出されたが、caspase-1の分解は検出されなかった。DEVD-CHO存在下に調整した細胞抽出液中においてビオチン化YVAD-CHOに結合する分子量、約15及び20 kDaの蛋白質が検出され、 新規caspaseの関与が示唆された。