ポスターセッション

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高リン酸化型Rb蛋白質の生化学的性質：武村政春¹,北川雅敏²,田矢洋一³,玉井克之⁴,秋山徹⁵,吉田松年¹（¹名大・医・病態研,²九大・生医研,³国立がんセ・研,⁴医学生物学研,⁵阪大・微研）

Biochemical properties of hyper-phosphorylated Rb proteins : Masaharu TAKEMURA¹,Masatoshi KITAGAWA²,Yoichi TAYA³,Katsuyuki TAMAI⁴,Tetsu AKIYAMA⁵,Shonen YOSHIDA¹ (¹Res. Inst. Dis. Mech. Cont.,Nagoya Univ. Sch. Med.,²Med. Inst. Biorg.,Kyushu Univ.,³Nat. Cancer Center Res. Inst.,⁴MBL Co. Ltd.,⁵Res. Inst. Microbial Dis.,Osaka Univ.)

【目的】我々はこれまでに、不活性型と考えられていたリン酸化型Rb蛋白質（Rb）がDNAポリメラーゼα（polα）活性を促進する事を見出した。そこで今回は、polα活性を促進する高リン酸化型Rbの生化学的検討を行った。
【結果】cdk2/cyclinEをRbと昆虫細胞内で共発現し、抗Rb抗体カラムを用いて高リン酸化型を大量に含むRb（ppRb2E）を精製した。これと、通常の発現、精製により得られたRb（pRb）のpolα促進活性を比較したところ、ppRb2Eにより強い活性が検出された。また、両者の非特異的DNA結合能をゲルシフト法で確認したところ、ppRb2Eにより強い結合能が検出された。この事は、Rbによるpolα促進にRbとDNAとの結合が関与する事を示唆している。また、抗phospho-Ser795、抗phospho-Ser807によるイムノブロットで比較したところ、pRbでは両部位がリン酸化されておらず、ppRb2Eでは両部位がリン酸化されている事が分かった。一方、抗phospho-Ser780はpRb、ppRb2Eともに反応した。これらの部位が促進活性に関与しているかは、今後の検討課題である。
一方、別のRbリン酸化酵素、cdk4/cyclinD1について、同様の共発現系によりリン酸化されたRb（ppRb4D1）を精製し、polα促進活性を検討した。その結果、ppRb4D1の促進活性はppRb2Eとは異なり、pRbと同程度であった。以上の結果は、Rbによるpolα活性促進にはcdk4/cyclinD1によるリン酸化よりもcdk2/cyclinEによるリン酸化の方が重要である事を示唆している。