ポスターセッション

一覧　トップ

ヒトTGF-β type II 受容体遺伝子におけるreplication slippageおよびtranscriptional slippageの検出用ベクターの開発：八島秀則¹、古内恵司¹、巴一¹、外木秀文¹、浜田淳一¹、細川真澄男²、守内哲也¹（北大・医・1癌研細胞制御、2癌研病理）

Establishment of a simple assay for replication slippage and transcriptional slippage in TGF-β type II receptor gene: Hidenori YASHIMA¹, Keiji FURUUCHI¹, Yi BA¹, Hidefumi TONOKI¹, Jun-ichi HAMADA¹, Masuo HOSOKAWA², Tetsuya MORIUCHI¹ (¹Div. Cell Biol. and ²Pathol., Cancer Inst., Hokkaido Univ. Sch. Med)

【背景・目的】ヒトTGF-β type II 受容体遺伝子にはエクソン3に10個アデニンが連続する配列（A10）が存在する。最近、ゲノムの不安定性を有する胃癌や大腸癌において、このアデニンの連続する部位に欠失や挿入変異が多数報告されており、DNA複製時の変異（replication slippage）の好発部位として注目されている。我々はこの部位のフレームシフト変異を鋭敏に検出する酵母アッセイ法の開発を行った。【方法・結果】TGF-β type II 受容体遺伝子エクソン3のcDNAに酵母のADE2遺伝子を連結した融合蛋白発現ベクターを作製した。これを制限酵素で処理しA10の部位を含む領域を削除した後、腫瘍由来のエクソン３PCR断片とともに酵母に導入した。酵母内では、遺伝子相同組み換えにより、腫瘍由来のDNAがベクターに挿入される。欠失や挿入などのフレームシフト変異があれば、読み枠がずれるため、ADE2は発現せず、酵母は赤コロニーを形成することが確認された。【考察】このアッセイ系を用いればA10部位のDNA複製時の変異(replication slippage)ばかりでなく、RNA転写の際の変異(transcriptional slippage)も解析可能である。